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首先我們要知道UHPLC 是什么,它的全稱是超高效液相色譜(Ultra-High Performance Liquid Chromatography),是色譜分離科學中的一個全新類別與新技術。在制造技術、擴散體積和耐受壓力方面進行了優化,采用小顆粒的固相,增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量,最大限度的發揮色譜性能。
色譜儀器作為一種精密儀器,一些不正確的操作或者忽視的實驗步驟,會導致儀器分析效果的不佳,甚至對儀器造成傷害。其中,最多出現的一些柱壓、漂移和峰型異常的問題,比如鬼峰、肩峰、峰型不準等。
故障1:出現肩峰
可能是樣品濃度太高,有濃度超載的情況??梢杂昧鲃酉嗯錁?,總的樣品體積小于第一峰的15%。如果樣品溶劑過強則采用較弱的樣品溶劑。也可能是出現了色譜柱塌陷的問題,如果出現了柱塌陷可以更換色譜柱或者打開進液端,用和柱填料相同的固定相修補。也可能是由于樣品中有一個和它極性非常接近的物質,兩者沒辦反*分離,所以就出現了肩峰的狀況。
故障2:出現鬼峰
對于等度色譜來說,出現鬼峰的原因主要是回收流動相、過載和沉淀、流路產生;對于梯度色譜,主要原因是溶液中有雜質的情況以及樣品中含蛋白質。很多情況下鬼峰的出現都是由于雜質顆粒物、蛋白質沉淀物和化學污染物引起的。在市場上有多款產品主要是針對固體顆粒物的攔截,但是對引起鬼峰出現的有機污染物卻不能起到攔截效果。恒譜生精心研發出一款鬼峰捕集小柱可以有效吸附去除系統中的極性較弱的雜質,從而防止系統中的雜質峰對目標峰的干擾。其安裝在梯度混合器和進樣器之間,不僅能夠去除流動相中的雜質,還可以有效的去除管路和混合器中的雜質。
故障3:出現峰拖尾
出現峰拖尾的現象情況有很多,比如樣品進樣量過大,或者是樣品濃度太高導致柱超載,這時應該降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相。
也可能是死體積或柱外體積過大,色譜柱柱效下降、柱頭塌陷等情況,可以更換合適的色譜柱,或者在色譜柱前加一個保護柱。恒譜生分析/制備保護柱可以起到截留導致色譜柱篩板堵塞、柱頭塌陷和柱效下降的化學物質和顆粒物。樣品和流動相的過濾可以維護保護柱對化學污染物的吸附容量,能夠更長時間的維護柱效。