色譜柱填料技術呈現二大趨勢。一個趨勢是快速液相,利用亞 2?m小粒徑硅膠、核殼型硅膠;第二大趨勢是越來越豐富的選擇性。填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數,即柱效和背壓。粒度越小,填充柱的柱效越高;小于3μm的填料應用,在相同選擇性條件下,提高柱效可提高分離度,但不是位一的因素。
如果固定相選擇是真確,但是分離度不夠,那么選擇更小粒度的填料是很用有的,3μm填料填充柱的柱數比相同條件下的5μm填料的柱效提高近30%。然而,3μm的色相譜的背壓卻是5μm的2倍。與此同時,柱效提高意味著在相同條件下可以選擇更短的色譜柱,以縮短分析時間,另外,可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色譜柱的壓力。
色譜柱填料方法有下面這些:
a、反相(與離子對)方法
C18(十八烷基或ODS)-----------普適性好;保留性強,用途廣
C8(辛基)-----------與C18相似,但保留值稍小
C3,C4-----------保留值小;大多用于肽類與蛋白質
C1【三加基硅烷(TMS)】------保留值??;不穩定
苯基,苯乙基-----------保留值適中;選擇性有所不同
CN(氰基)-----------保留值適中;正相和反相均可使用
NH2(氨基)-----------保留性弱;用于烴類;欠穩定
聚苯乙烯基b-----------在1<PH<13的流動相中穩定;對某些分離峰形好,柱子壽命長
b、正相方法
CN(氰基)-----------普適性好;極性適中;用途廣
OH(二醇基)-----------極性大于CN
NH2(氨基)-----------極性大,欠穩定
硅膠b------------普適性好;價廉;操作欠方便;用于制備LC
c、空間排阻方法
硅膠b-----------普適性很好;作吸附劑用
硅烷化硅膠-----------吸附性弱,溶劑兼容性好;適用于有機溶劑
OH(二醇基)------------欠穩定;在水SEC中使用(凝膠過濾)
聚苯乙烯基b------------廣泛用于有機SEC(凝膠滲透);一般與水和極性大的有機溶劑不相容
d、離子交換方法
鍵合相------------穩定性與重現性均不好
聚苯乙烯基b-------------柱效不高;穩定;重現性好
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