反相色譜柱是我們應用廣泛的色譜柱類型，反相色譜柱鍵合相主要包括：C18、C8、C4、Phenyl、aQ、等。對于以上色譜柱，我們在使用及維護的時候可以按照同樣的操作方式：

　　1、在條件允許情況下，在使用前最好對新色譜柱按照說明書方法進行柱效測試。以確保色譜柱的正常。

　　2、所有硅膠基質色譜柱使用溫度應低于60℃。

　　3、樣品

　　最好將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解在初始流動相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應含有任何顆粒物，最好使用0.5μm或更小粒徑的濾膜過濾。樣品溶液如果使用強溶劑（例如，流動相為水，樣品溶劑為甲醇），為達到較好峰形，需要降低進樣量（以250x4.6mm規格為例，小于10μL）。

　　4、流動相

　　所有流動相，特別是含有緩沖鹽的流動相，反相色譜柱最好當日實驗當日配制；如果使用了前日配制的流動相，請確保流動相pH值沒有變化，并確保流動相沒有長菌。流動相的pH值取決于您的應用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱盡量在pH2~8范圍內使用。請盡量避免在常規流動相中使用很高比例的水（>95%）作為流動相，可能會造成保留時間的不穩定或者色譜柱鍵合相的損害。如果使用高比例水或者100%水相為流動相，建議使用親水柱。

　　5、色譜柱平衡

　　在進行分析之前，請使用至少20倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，以使色譜柱達到平衡。

　　色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算：

　　V=0.68πr2

　　V為色譜柱柱體積（mL），r為色譜柱內徑（cm），L為色譜柱長度（cm）。

　　6、色譜柱保護

　　對于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請盡量使用在線濾器或保護柱，如果可能，使用SPE小柱對樣品進行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。

　　7、色譜柱清洗

　　常規清洗：

　　在儲存反相色譜柱之前，請使用至少20倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱（去除緩沖鹽），再用更強的溶劑沖洗色譜柱（去除強保留成分，反相色譜通常使用甲醇或乙腈），然后使用合適的溶劑儲存色譜柱。