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影響液相色譜柱性能的物理因素有哪些呢

更新時間:2020-11-17      點擊次數:2094
   影響液相色譜柱性能的物理因素有哪些呢?
  液相色譜柱效受柱內外因素影響,為使色譜柱達到佳效率,除柱外死體積要小外,也要有合理的柱結構(盡可能減少填充床以外的死體積)及裝填技術。即使好的裝填技術,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情況總是不一樣的,靠近管壁的部位比較疏松,易產生溝流,流速較快,影響沖洗劑的流形,使譜帶加寬,這就是管壁效應。
  為提高分析靈敏度,與質譜(MS)聯接,而發展出窄徑柱、毛細管柱和內徑小于0.2mm的微徑柱(MICROBORE)。細管徑柱的優點是:①節省流動相;②靈敏度增加;③樣品量少;④能使用長柱達到高分離度;⑤容易控制柱溫;⑥易于實現LC-MS聯用。
  影響液相色譜柱性能的物理因素分別有下面這些:
  (1)硅膠純度
  硅膠純度和殘留金屬離子濃度,硅膠的雜質會影響化合物的峰形,硅膠表面的金屬含量高會影響堿性化合物的峰形,易發生拖尾。
  (2)色譜柱尺寸
  填料床的長度和內徑,增加色譜柱長度,可以在一定程度上提高柱效,但也會升高壓力和導致峰展寬;寬柱徑,提高載樣量,但也會增加橫向擴散,同樣會導致峰展寬。窄柱徑可以節約溶劑,可減少橫向擴散,但壓力較大,對系統要求較高。
  (3)顆粒形狀及粒徑
  球形顆粒柱效高、重現性好、柱床結構均勻,不規則形柱床結構不均勻、流動相線速度不均勻,容易譜帶展寬;平均顆粒直徑,粒徑越小,柱效越高,柱壓也越高。粒徑分布越廣則柱效越低,壓力越大。
  (4)顆粒表面積
  顆粒外表面和內部孔表面的總和,以m2/g表示,相對而言高表面積對樣品具有較強的保留能力,更大的液相色譜柱柱容量和分離度。而低表面積能更快達到平衡狀態,更適合梯度洗脫程序。
  (5)孔徑
  顆粒的孔或腔的平均尺寸,范圍是80~300?,大孔徑的填料顆??梢匝娱L大分子溶質在填料表面的滯留時間,改善分離,所以大孔徑填料適合分離大分子化合物或者水動力體積較大的分子。