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液相色譜柱選擇的方法和條件有哪些呢

更新時間:2021-08-03      點擊次數:1252
   液相色譜柱技術包括填料技術和裝柱技術,填料技術自不待言,填料的好壞對色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術也沒有想象中的這么簡單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內徑和長度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩定、均一的柱床,更多是一門藝術,需要經驗積累。
  該色譜柱裝填實際上是有一定技巧和程序,可能還有一些運氣。一般使用高壓勻漿方法裝填。也就是能讓填料在溶劑內均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實,這實際上用到了不同比例的勻漿液體,和合適的壓力。壓力太大,顆粒破碎,壓力太小,塔板數少。同時壓力需要穩定,不然分布不均,拖尾嚴重。同時還有頭上平整程度。套上套,就可以用了。
  液相色譜柱選擇的方法和條件介紹:
  ①填料基質
  a.硅膠基質:純度高本錢低,強度大,化學修飾輕易,但pH值范圍有限。大多硅膠基質填料在pH2-8之間穩定,但經過特殊修飾的硅膠鍵合相可以穩定在pH1.5-10。
  b.聚合物基質:應用pH值范圍寬,溫度穩定(高溫可以達到80度以上),機械強度小。
 ?、陬w粒外形
  大多現代HPLC填料都是球形顆粒,但有時是不規則的顆粒。球形顆粒提供較低的柱壓、較高的柱效和穩定性以及較長的柱壽命在使用高粘度的活動相時;不規則顆粒有較大比表面積和相對低廉的價格。
 ?、垲w粒粒徑
  粒徑越小柱效越高、分離度越高,但同時會導致較高柱壓降。選擇1.5-3μm的填料以解決一些復雜樣品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒徑的填料用作半制備或制備柱。
  ④含碳量
  含碳量指的是硅膠表面鍵合相的比例,與比表面積和鍵合覆蓋度等有關。高含碳量進步柱容量、分辨率及分析時間,用于要求高分離度的復雜樣品;低含碳量分析時間短、展現不同的選擇性,用于快速分析簡單樣品及需要高含水活動相條件的樣品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
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