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硅膠色譜柱再生的方法是什么?

更新時間:2021-11-16      點擊次數:1602
   1.硅膠色譜柱的平衡
    硅膠色譜柱由工廠測試后是保存在水中的。新柱應先使用10-20倍柱體積的甲醇沖洗硅膠色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡硅膠色譜柱,您就會在處理問題方面獲得的"補償",而且您的硅膠色譜柱的壽命也會變得更長!操作步驟:
  a.平衡開始時將流速緩慢地提高,用流動相平衡硅膠色譜柱直到獲得穩定的基線(緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低,則需要較長的時間來平衡)
  b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽,應注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡;分析結束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。
  2.硅膠色譜柱的再生
  長期使用的硅膠色譜柱,往往柱效會下降(柱子的理論塔板數減低)。可以對硅膠色譜柱進行再生,在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。
  建議用來沖洗柱子的溶劑體積
  硅膠色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積
  125-4mm1.6ml30ml
  250-4mm3.2ml60ml
  250-10mm20ml400ml
  選擇再生方法:
  極性固定相(如Si,NH2*,DIOL基色譜填料)的再生:
  正庚烷→→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
  非極性固定相(如反相色譜填料RP-18,RP-8,CN等)的再生:水→乙腈→(或異丙醇)→乙腈→水
  注意:
  a.在對NH2改性的硅膠色譜柱進行再生時,由于NH2可能以銨根離子的形式存在,因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液*流出稀硫酸可以用來清洗已污染的硅膠色譜柱,如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質,在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。
  3.硅膠色譜柱的維護
  a.使用預柱保護分析柱(硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度)
  b.大多數反相硅膠色譜柱的pH穩定范圍是2-7.5,盡量不超過該硅膠色譜柱的pH范圍
  c.避免流動相組成及極性的劇烈變化
  d.流動相使用前必須經脫氣和過濾處理
  e.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相,應在實驗完畢柱子沖洗干凈,并保存于甲醇或乙腈中
  f.氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性,故使用時要注意,柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑,以避免腐蝕